蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要執(zhí)行者，在植物生長發(fā)育及逆境適應(yīng)性中起重要作用。然而，蛋白質(zhì)極少單獨(dú)行動(dòng)，它們更像一個(gè)精密協(xié)作網(wǎng)絡(luò)中的成員，通過“蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用”形成復(fù)雜的復(fù)合體，從而傳遞信號(hào)、執(zhí)行功能。驗(yàn)證一對(duì)蛋白的相互作用通常需要使用4-5種方法，目前最常用的蛋白互作驗(yàn)證包括酵母雙雜交（Yeast Two-Hybrid）、雙分子熒光互補(bǔ)（BiFC）、熒光素酶互補(bǔ)（Split-LUC）、下拉實(shí)驗(yàn)（Pull-down）及蛋白質(zhì)免疫共沉淀（Co-IP）等。每種蛋白互作實(shí)驗(yàn)分別需要構(gòu)建不同的載體，因此，驗(yàn)證1對(duì)蛋白互作需要針對(duì)每個(gè)基因設(shè)計(jì)4-5對(duì)引物，做4-5次PCR及4-5次PCR產(chǎn)物回收，才能將目的基因克隆到不同的互作載體中，不僅引物設(shè)計(jì)和克隆過程復(fù)雜，而且成本高昂。

近日，湖南大學(xué)生物學(xué)院伍斗生/于峰課題組在國際知名期刊Plant, Cell & Environment發(fā)表了題為One Primer Pair for All: A Standardized Vector Toolbox for Protein-Protein Interactions and Protein Localization in Plants的技術(shù)報(bào)告。

該文章基于In-Fusion克隆技術(shù)，首先改造了常用蛋白互作載體克隆區(qū)域的酶切位點(diǎn)，改造后的載體均使用BamHI和SalI進(jìn)行酶切（命名為PPI-BS），無需購買多余的酶；其次改造了BamHI和SalI酶切位點(diǎn)上下游的同源重組序列。改造后的載體工具盒PPI-BS，針對(duì)1個(gè)基因只需要設(shè)計(jì)1對(duì)引物，做1次PCR反應(yīng)及產(chǎn)物純化，便可通過In-Fusion反應(yīng)將目的基因克隆至任意的蛋白質(zhì)互作及亞細(xì)胞定位載體中，極大地簡化了蛋白互作等載體構(gòu)建中的引物設(shè)計(jì)、PCR反應(yīng)及回收等過程，同時(shí)還極大地節(jié)約了載體構(gòu)建的成本，包括引物合成、PCR試劑及產(chǎn)物回收試劑等。改造后的PPI-BS載體已提交至Addgene，可預(yù)訂后獲取，也可聯(lián)系通訊作者獲取PPI-BS載體及圖譜。

湖南大學(xué)生物學(xué)院伍斗生教授為通訊作者，湖南大學(xué)生物學(xué)院碩士研究生羅彩琳、博士研究生王立海天及碩士研究生吳玉琴為共同第一作者，博士研究生蔡俊及碩士研究生彭濱參與了該工作，湖南大學(xué)于峰教授及陳佳博士（現(xiàn)西北農(nóng)林科技大學(xué)副教授）指導(dǎo)了本工作的開展。該研究得到了國家自然科學(xué)基金、中國科協(xié)青年人才托舉計(jì)劃及湖南省青年科技人才等項(xiàng)目的資助。

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https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/pce.70219