EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）是 Epstein 和 Barr 于 1964 年最先從非洲人伯基特淋巴瘤組織培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)的一類皰疹病毒，感染全球超過90%成人，是傳染性單核細胞增多癥的主要病因，并與多種上皮細胞來源（如鼻咽癌、胃癌）和 B 細胞來源（如伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤）的惡性腫瘤密切相關(guān)。

EBV感染 B 細胞依賴于病毒糖蛋白gp42與 B 細胞表面的HLA class II (HLA-II) 分子的結(jié)合，以此觸發(fā)由gH/gL和gB介導的膜融合過程。病毒附著則依賴于gp350與補體受體CD21或CD35的結(jié)合；對于上皮細胞感染，過程則更為復雜，且不依賴于gp42（甚至抑制上皮細胞感染）。既往研究發(fā)現(xiàn)， EphA2、NRP1)等分子參與上皮細胞的感染。

一個長期無法解釋的現(xiàn)象是，能夠中和gH/gL的單克隆抗體AMMO1可同時有效抑制EBV對兩類細胞的感染。這強烈暗示，在上皮細胞和 B 細胞中，可能存在一個共同的、未被發(fā)現(xiàn)的宿主受體或分子機制，是gH/gL發(fā)揮作用的關(guān)鍵，也是AMMO1的作用靶點。

2025 年 6 月 ，中山大學腫瘤防治中心曾木圣、鐘茜教授團隊在Nature發(fā)表題為R9AP is a common receptor for EBV infection in epithelial cells and B cells的重磅研究。該研究首次發(fā)現(xiàn) R9AP 在上皮細胞和 B 細胞中表達，并作為受體識別 EBV 病毒感染，提示 R9AP是 EBV 防治及疫苗開發(fā)的新靶點。他們鑒定并驗證R9AP（由基因RGS9BP編碼）是EBV感染 B 細胞和上皮細胞所共同必需的全新受體，解決了該領(lǐng)域一個長達數(shù)十年的懸而未決的關(guān)鍵問題。

該研究的篩選策略非常巧妙。他們注意到，永生化的人鼻咽上皮細胞（NPECs）在形成球樣細胞（SLCs） 時，EBV感染效率遠高于單層貼壁細胞（MLCs）。這提示，SLCs中可能高表達某種未知的EBV受體。首先，通過全基因組微陣列分析，并對比了SLCs和MLCs的基因表達譜（差異分析），篩選出在SLCs中顯著上調(diào)的膜相關(guān)基因。

然后是功能性篩選，利用siRNA文庫逐一敲低這些候選基因，觀察其對EBV感染效率的影響。最終，四個基因（CNGA1, GPR1, SLC26A9, R9AP）的敲低能使感染效率下降超過50%。在確證實驗中，只有R9AP在所有被測易感細胞系中均有蛋白表達，并且過表達R9AP能顯著增強HEK293T細胞的EBV感染能力，而其他幾個不能。由此，R9AP被鎖定為TOP候選受體。

接著從R9AP功能上進行遺傳學與生物化學驗證。文章通過一系列嚴謹實驗，從必要性和充分性兩個角度提供了令人信服的證據(jù)。

1. 必要性驗證（Loss-of-function）。基因敲低，在鼻咽上皮細胞（HNE1）中敲低R9AP，能顯著降低EBV感染率。基因敲除，在上皮細胞（HNE1, AGS, MKN74）和 B 細胞（Raji）中構(gòu)建R9AP敲除細胞系，發(fā)現(xiàn)EBV感染效率可降至接近背景水平。這是非常強的證據(jù)，排除細胞群體異質(zhì)性干擾。回補實驗（Rescue），在R9AP敲除的細胞中重新表達R9AP，能夠有效恢復其對EBV的感染。這完美證明表型的特異性是由R9AP缺失引起的，而非脫靶效應(yīng)。

2. 充分性驗證（Gain-of-function）。在原本不易感或感染效率較低的細胞（如CNE1鼻咽細胞、AGS胃癌細胞、EBV陰性Akata B細胞）中過表達R9AP，能顯著增強EBV感染效率。這些實驗雄辯地證明，R9AP對于EBV感染上皮細胞和 B 細胞都是必需且充分的。

接下來的關(guān)鍵是機制：R9AP如何介導EBV入侵？實驗發(fā)現(xiàn)，操縱R9AP的表達（敲除或過表達）并不影響EBV病毒顆粒與細胞的結(jié)合（Binding），但顯著影響病毒進入細胞（Entry）的效率。細胞融合實驗證明，R9AP缺失會削弱由EBV糖蛋白（gH/gL, gB）驅(qū)動的膜融合過程。這些數(shù)據(jù)表明，R9AP的作用發(fā)生在病毒附著的下游階段，即膜融合步驟。

直接互作實驗驗證R9AP與gH/gL復合體結(jié)合！①免疫共沉淀（Co-IP）：在過表達細胞中，R9AP特異性地與gH/gL復合物共沉淀，而與gH單獨或gB的相互作用很弱或無。②體外Pull-down實驗：使用純化的重組蛋白（GST-R9AP 和 His-gH/gL），證實兩者在細胞外環(huán)境下的直接結(jié)合。③生物膜干涉技術(shù)（BLI）：精確測定R9AP與gH/gL的結(jié)合親和力（KD = 3.27 nM），證明這是一種高親和力、直接的分子互作。④共定位研究：免疫熒光顯示，病毒顆粒（用熒光標記的gp350抗體示蹤）與細胞表面的R9AP存在顯著的共定位。這些都是驗證蛋白互作的實驗，既有經(jīng)典的，也有前沿的，真的超級棒！

隨后，研究人員破解了AMMO1中和抗體的機制。競爭性BLI實驗和Co-IP實驗證明，中和抗體AMMO1能夠有效地競爭性抑制R9AP與gH/gL的結(jié)合（競爭比率Ra/R0 = 0.39），而另一個主要抑制上皮細胞感染的抗體CL59則不能。這直接揭示AMMO1廣譜中和作用的分子機制：它通過占據(jù)gH/gL上與R9AP結(jié)合的關(guān)鍵表位，從而阻斷了病毒入侵所必需的關(guān)鍵受體-配體相互作用。

基于上述發(fā)現(xiàn)，研究人員整合已知通路，提出全新統(tǒng)一模型。在 B 細胞中，R9AP與經(jīng)典的gp42-HLA-II通路協(xié)同工作?？扇苄詆p42會抑制gH/gL與R9AP的結(jié)合，但當gp42先與HLA-II結(jié)合后，會引發(fā)gH/gL構(gòu)象變化，反而促進其與R9AP的結(jié)合，最終觸發(fā)gB介導的融合。在上皮細胞中，R9AP與之前發(fā)現(xiàn)的EphA2同時與gH/gL結(jié)合，形成復合物，共同促進膜融合。而NRP1在此過程中與R9AP沒有冗余功能。

該研究不僅揭示了基礎(chǔ)機制，還立即探索了其轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景?；赗9AP與gH/gL互作的關(guān)鍵區(qū)域（N端19-30氨基酸），他們合成了一個抑制性短肽（R9AP^{19-30}）。該多肽能在體外以劑量依賴的方式有效抑制EBV對原代上皮細胞和B細胞的感染，并在一人源化小鼠模型中顯著降低病毒載量、減少脾臟中EBV陽性細胞數(shù)量，并延長感染小鼠的生存期。由于R9AP是膜蛋白，他們開發(fā)了靶向R9AP的中和性單克隆抗體5E9。該抗體能在體外有效阻斷EBV對各類上皮細胞和 B 細胞的感染，以及對原代人 B 細胞和鼻咽上皮細胞的感染。

該研究是國人在病毒學領(lǐng)域的重磅發(fā)現(xiàn)， 是病毒學領(lǐng)域的重大突破，可與北生所李文輝教授破解HBV受體的研究相互媲美！首先，研究人員發(fā)現(xiàn)一個全新、通用的EBV受體R9AP，徹底更新我們對于EBV宿主細胞入侵機制的認知，從過去并行的“雙路徑”模型，升級為以gH/gL-R9AP相互作用為核心，在不同細胞類型中與不同輔助受體（HLA-II或EphA2）協(xié)同作用的統(tǒng)一模型；完美解釋為何AMMO1抗體能廣譜中和，回答了領(lǐng)域內(nèi)一個長期存在的根本性問題。

在科研邏輯上，從遺傳學（敲除、回補）到生物化學（直接結(jié)合、高親和力）、從體外到體內(nèi)， 這篇論文進行 多層次、無死角驗證，結(jié)論堅實可靠。在臨床轉(zhuǎn)化上，揭示了R9AP-gH/gL互作界面是開發(fā)新型廣譜預(yù)防性藥物（多肽、小分子）、治療性抗體以及新型疫苗的極佳靶點。這項工作是基礎(chǔ)研究與轉(zhuǎn)化應(yīng)用緊密結(jié)合的典范！它再次證明，對生命過程最基本規(guī)律的深刻探索，往往是通往人類健康福祉的最有效路徑。

除了這篇頂刊論文，2025 年 6 月 ，中山大學附屬第一醫(yī)院許杰教授團隊在Nature雜志發(fā)表題為NINJ1 regulates plasma membrane fragility under mechanical strain的研究論文。2025 年 5 月 ，中山大學腫瘤防治中心康鐵邦教授團隊在Science雜志發(fā)表題為ASB7 is a negative regulator of H3K9me3 homeostasis的研究論文，發(fā)現(xiàn) E3 泛素連接酶 ASB7 是 H3K9me3 的核心負調(diào)控因子，揭示了 ASB7 擴增導致基因組不穩(wěn)定并賦予腫瘤對 PARPi 敏感性。

建校百年的中山大學，山高水長！