編碼Otoferlin的OTOF基因病理性突變可導致常染色體隱性耳聾9 （DFNB9）【1-2】 。功能性Otoferlin的缺乏使DFNB9患者表現(xiàn)為先天性重度至完全感音神經(jīng)性聽力損失【3-5】 。 基于核酸重組或蛋白重組的雙AAV治療體系成功挽救大基因OTOF模型耳聾小鼠聽力 。但是， 核酸重組和蛋白重組在OTOF雙AAV治療體系療效上的本質差異仍然缺乏深入探究，影響包括但不限于OTOF乃至更廣泛致聾基因在內的潛在治療體系開發(fā)，以實現(xiàn)的最佳療效挖掘使耳聾患者康復的最大獲益。

近日，復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院舒易來教授等團隊在Molecular Therapy雜志發(fā)表了題為Comparative analysis of RNA versus protein splicing in dual AAV-mediated gene therapy in a mouse model of DFNB9 deafness的研究文章，利用動物模型從聽力學、組化學、電生理等在長時間尺度上系統(tǒng)評價了核酸重組和蛋白重組在療效上差異。

世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)顯示，全球20%的人有不同程度的聽力損失，5%的人患有致殘性（中度以上）的聽力損失，約有2600萬先天性耳聾患者。每年，我國約有3萬新生聾兒。聽力障礙，不僅僅意味著失聰，更常伴隨著言語障礙，“十聾九啞”成為了殘酷的現(xiàn)實。而約60%的先天性耳聾是由遺傳因素所導致的，已知的耳聾基因超過200多個，目前尚無任何臨床獲批治療藥物。目前研發(fā)的突破針對的是耳畸蛋白缺陷（OTOF耳聾基因突變）所致的耳聾。

研究團隊構建了5種雙AAV治療系統(tǒng)，包括AAV1-Myo15-AK、AAV1-Myo15-AP、AAV1-Myo15-TS、AAV1-CMV-AK和AAV1-CMV-intein?；诤怂嶂亟M策略中，AAV1- Myo15-AK將Otof -/-小鼠的聽力恢復到55-70 dB，優(yōu)于AAV1- Myo15-AP和AAV1- Myo15-TS?；诘鞍字亟M策略，AAV1-CMV-intein使Otof -/-小鼠聽力恢復到35-70 dB，優(yōu)于AAV1-CMV-AK，在新生和成年小鼠的中均持續(xù)了12個月以上。在新生鼠Otof -/-治療后 1 個月時，我們觀察到在AAV1-CMV-intein組中，頂圈、中圈和底圈的 IHC 中表達 Otoferlin 的百分比分別為 68.30% ± 3.78%、67.05% ± 8.46% 和 68.59% ± 6.36%，而在 AK 組中，這三個圈的 IHC 中 Otoferlin 的表達分別為 58.03% ± 8.12%、58.35% ± 5.24% 和 58.74% ± 10.67%。intein組的 Otoferlin 表達與 AK 組相似。而在新生鼠治療5 個月后，intein 組的耳蝸頂圈、中圈和底圈中Otoferlin 表達分別為 66.18% ± 5.50%、81.83% ± 4.83% 和 71.75% ± 6.93%；而 AK 處理的耳蝸中分別為 28.82% ± 6.86%、23.14% ± 5.72% 和 19.12% ± 7.42。這些結果表明，在頂圈、中圈和底圈中，intein組中全長 Otoferlin 的穩(wěn)定表達高于 AK 。治療組中突觸數(shù)量恢復也得到了相似的結果，在注射后 1 個月和 5 個月時，對Otoferlin蛋白表達內毛細胞中 Ctbp2 標記的帶狀突觸數(shù)量進行了計數(shù)。在治療后1個月時，intein組（10.30 ± 0.30）的帶狀突觸數(shù)量高于 AK 組（8.77 ± 0.3）。5 個月后，intein 組的突觸數(shù)量（9.71 ± 0.36）仍高于 AK 組（7.40 ± 0.30），這一結果與聽力恢復水平和 Otoferlin 表達水平一致。而我們在成年小鼠治療中也得到了類似的結果。

多年來，復旦大學舒易來教授等團隊創(chuàng)新采用雙腺相關病毒（AAV）載體遞送系統(tǒng)，以基因置換策略，將正常的人源OTOF編碼序列導入患者內耳感受聲音的毛細胞，促使毛細胞能夠表達正常功能的耳畸蛋白，從而從根本上改善聽力和言語。

該研發(fā)面臨兩大挑戰(zhàn)。首先是遞送系統(tǒng)的構建。AAV是最常用的基因治療遞送載體，但OTOF基因編碼序列超出了單個載體的裝載容量。研究團隊采用雙AAV載體拆分遞送策略，成功突破單載體基因容量限制的技術瓶頸，在耳蝸細胞內實現(xiàn)基因序列的精準重組。二是給藥困難。耳蝸位置深、細胞種類多，且被骨質結構包繞，針對耳蝸靶向遞送的技術挑戰(zhàn)，團隊經(jīng)過反復摸索，自主研發(fā)出了一套精準、微創(chuàng)的耳部遞送路徑和給藥裝置，為耳聾基因治療提供了重要保障。

本研究表明，蛋白重組比核酸重組對OTOF模型鼠的基因治療更有效。這為未來選擇雙載體基因治療OTOF突變及其他大基因突變的重組策略提供了客觀基礎依據(jù)。

原文鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1525001625008238

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